méthode

PCR

PCR is a method for amplifying specific DNA sequences through repeated cycles of heating and cooling.
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Description

La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une méthode enzymatique d'amplification (copie multiple) de l'ADN en tube (in vitro). Elle permet de synthétiser sélectivement une énorme quantité de copies d'un fragment d'ADN donné, en utilisant une ADN polymérase thermostable (enzyme résistant aux températures élevées) et des cycles de changement de température. La méthode a révolutionné la biologie moléculaire, la médecine et la criminalistique.

Histoire

Le concept d'amplification de l'ADN par cycles répétés de réplication a été proposé par Kary Mullis en 1983, alors qu'il travaillait à la société de biotechnologie Cetus Corporation. L'idée lui est venue lors d'un trajet en voiture de nuit sur une autoroute californienne. Les premières expériences utilisant le fragment de Klenow (instable à haute température) étaient fastidieuses, car il fallait ajouter l'enzyme après chaque cycle de dénaturation. La percée clé a été l'utilisation de l'ADN polymérase thermostable Taq, isolée des bactéries thermophiles de Yellowstone, ce qui a permis d'automatiser le processus. En 1993, Mullis a reçu le prix Nobel de chimie. Depuis, la méthode n'a cessé de s'améliorer : la PCR en temps réel (qPCR), la PCR numérique et d'autres variantes sont apparues.

Comment ça marche

Le processus comprend trois étapes principales : (1) Dénaturation à ~95°C — rupture des liaisons hydrogène entre les brins complémentaires d'ADN, produisant des matrices simple brin. (2) Hybridation des amorces à ~50–65°C — liaison spécifique des courtes amorces oligonucléotidiques aux régions complémentaires sur les matrices. (3) Élongation à ~72°C — l'ADN polymérase thermostable synthétise un nouveau brin d'ADN à partir de l'extrémité 3' de l'amorce, en utilisant des désoxynucléotides triphosphates (dNTP) comme blocs de construction. Les cycles sont répétés 25 à 40 fois dans un thermocycleur. Le paramètre clé est la spécificité, assurée par le choix des amorces et l'optimisation de la température d'hybridation. La version quantitative (qPCR) utilise des sondes fluorescentes pour suivre en temps réel l'accumulation du produit, ce qui permet de déterminer la quantité initiale de matrice.

En pratique

Base des tests COVID-19, des tests de paternité et de la recherche de criminels à partir d'une goutte de sang.

Anecdote

La sensibilité de la PCR est telle qu'il est théoriquement possible de détecter une seule molécule d'ADN dans un échantillon. C'est pourquoi les tests de coronavirus pouvaient détecter l'infection aux stades les plus précoces.

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